polyplus-transfection FectoPRO說明書
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| 試劑 | FectoPRO ® |
|---|---|
| 分子交付 | 脫氧核糖核酸 |
| 應用 | 生物生產 |
| 細胞類型 | 懸浮液 CHO、HEK-293 和衍生物 |
| 轉染次數 | 1 mL FectoPRO ®足以將 800 mL 的細胞培養物轉染超過 1 L |
| 貯存 | 5°C ± 3°C，如果儲存得當，自生產之日起可穩定 3 年 |
| 提供 | FectoPRO ®助推器 |
使用瞬時轉染和基因表達實現蛋白質產量。
FectoPRO轉染試劑專為使用低 DNA 量（< 1 µg/ml 細胞培養物）在各種無血清培養基中的懸浮 CHO 和 HEK-293 細胞中增強瞬時基因表達 (TGE)而設計。
FectoPRO® 介導的轉染過程可以輕松地從幾毫升細胞培養物擴展到幾升細胞培養物，確保強大的可重復蛋白質生產。更高的生產力和低 DNA 量要求使 FectoPRO® 成為生物生產過程的經濟高效的解決方案。
| 參考編號 | 產品 | 轉染試劑 | 表達助推器 | 表達培養基 |
|---|---|---|---|---|
| 116-001 | FectoPRO® 試劑 | 1 毫升 | 1 毫升 | —— |
| 116-010 | FectoPRO® 試劑 | 10 毫升 | 10 毫升 | —— |
| 116-100 | FectoPRO® 試劑 | 100 毫升 | 100 毫升 | —— |
| 716-06L | FectoCHO® CD 培養基 | —— | —— | 6 x 1 升 |
| 716-01LKIT | FectoCHO® 表達系統 | 1 毫升 | 1 毫升 | 1升 |
FectoPRO ®在無血清培養基中懸浮生長的 CHO 和 HEK-293 細胞中實現了驚人的高蛋白質和抗體產量（圖 1）。
圖 1. FectoPRO ®在懸浮 CHO 細胞中產生驚人的抗體產量。將細胞以 1 x 10 6細胞/ml接種到30 ml FreeStyle™ CHO 表達培養基中，并按照各自推薦的方案用 FectoPRO ® (0.8 µg DNA/ml) 或 FreeStyle™ MAX 試劑 (1.25 µg DNA/ml)轉染試劑。使用蛋白 G 生物傳感器（fortéBIO ®octet RED96 系統）在轉染后 1 至 6 天測定重組小鼠 IgG 的產量。FreeStyle™ 是 Life Technologies™ Corporation 的商標。數據由 ProteoGenix SAS（法國）友情提供。
探索我們專用于 cho 細胞的試劑盒：FectoCHO ®表達系統
在轉染效率方面，FectoPRO ®在很大程度上優于其他轉染試劑，例如生物生產過程中常用的線性 PEI（圖 2），從而導致更高的蛋白質產量（圖 3）。
圖 2. FectoPRO ®在懸浮 CHO 細胞中提供高轉染效率。將 FreeStyle™ CHO-S 細胞以 1 x 10 6 個細胞/ml接種到30 ml FreeStyle™ CHO 表達培養基中，并使用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster 或 FreeStyle™ MAX Reagent 使用 0.4 µg/ml 和 1.25 µg/ml分別是 GFP 表達質粒。使用熒光顯微鏡在轉染后 24 小時測定 GFP 表達。
圖 3. FectoPRO ®在懸浮 CHO 和 HEK-293 細胞中提供了蛋白質產量。FreeStyle™ CHO-S 和 HEK-293F 細胞以 1 x 10 6細胞/ml接種在 30 ml FreeStyle™ CHO 或 293 表達培養基中，并用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.4 µg DNA/ml)、FreeStyle™轉染MAX Reagent (1.25 µg DNA/ml) 或 PEIpro ® (1 µg DNA/ml) 遵循各自試劑的推薦方案。在轉染后 72 小時（CHO 細胞）和 120 小時（HEK-293 細胞），通過蛋白 G 親和定量 (HPLC) 和蛋白質印跡分析 IgG3-Fc (34 kDa) 的產生。標準品對應于純化的 IgG3-Fc (34 kDa)。
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高質量的質粒 DNA 制備可能非常昂貴，尤其是當大規模蛋白質生產需要大量 DNA 和許多質粒時。FectoPRO ®使用 0.4 至 0.6 µg DNA / 10 6細胞 / ml 細胞培養物可節省 40 至 60% 的 DNA 成本；因此使該套件成為生物生產過程的經濟實惠的解決方案。
表 1.根據制造商的建議，用于轉染的 DNA 量和試劑量（FectoPRO ®和競爭對手）。
蛋白質生產過程的持續時間在過去幾年有所增加，現在大多數蛋白質生產過程持續 1-2 周以獲得最佳蛋白質生產量。FectoPRO ® 的開發旨在確保持續數天的蛋白質生產，同時保持高細胞活力以實現更持久的蛋白質生產（圖 4）。
圖 4. FectoPRO ®在懸浮細胞中提供持續的蛋白質生產。FreeStyle™ HEK-293F 細胞以 1 x 10 6細胞/ml接種在 30 ml FreeStyle™ 293 表達培養基中，并按照標準方案用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.5 µg DNA/ml)轉染。在不同時間點后通過蛋白 G 親和力定量 (HPLC) 測定 IgG3-Fc 的產生。使用 FreeStyle™ CHO-S 獲得了類似的結果（數據未顯示）。
使用可輕松適應各種培養容器的強大方案簡化您的生物生產過程。FectoPRO ®介導的轉染可以從 30 毫升線性擴展到升細胞培養物，無需修改方案（圖 5）。
圖 5. FectoPRO ®在 CHO 細胞中易于擴展和重現。FreeStyle™ CHO-S 細胞以 1 x 10 6 個細胞/ml接種在 30 ml、100 ml、300 ml 或 1 L FreeStyle™ CHO 表達培養基中，并用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.5 µg DNA/ml)轉染. 在第 1 天至第 6 天，使用臺盼藍排除測定法測定細胞活力，并通過蛋白 G 親和力定量 (HPLC) 和蛋白質印跡法測定 IgG3-Fc 的產生。標準品對應于純化的 IgG3-Fc (34 kDa)。
FectoPRO ®是使用高度受控的生產過程制造和配制的。這確保了從實驗到實驗的高度可重復的結果。此外，為了滿足當前的監管指南，FectoPRO ®發布時采用了先進的質量控制，包括蛋白質生產力規范，以保證批次間的出色一致性（圖 6）。
圖 6. FectoPRO ®具有出色的批次間重現性。懸浮CHO細胞以1 x 10 6細胞/ml接種在30ml CHO培養基中，并按照標準方案使用3個不同批次的FectoPRO ® (CCIII 078、CCIII 104或CCIII 106)進行轉染。轉染后 72 小時，通過蛋白 G 親和力定量分析 IgG3-Fc 的產生。在懸浮的 HEK-293 細胞上獲得了類似的結果（數據未顯示）。
與其他市售試劑不同，FectoPRO ®轉染試劑盒適用于 CHO 和 HEK-293 細胞（圖 2 和 3）。該試劑兼容多種培養基配方；因此，實驗室實施簡單明了（圖 7，表 2）。
圖 7. FectoPRO ®在不同培養基中生長的懸浮 CHO 細胞中提供了蛋白質產量。將 CHO 細胞以 1 x 10 6細胞/ml接種到30 ml FreeStyle™ CHO 表達培養基、CD CHO 培養基或 Pro-CHO™ 4 培養基中，并按照推薦的方案用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster 或 FreeStyle™ MAX 試劑轉染各自的試劑。在轉染后 72 小時通過蛋白 G 親和定量 (HPLC) 測定 IgG3-Fc 的產生。
表 2.在不同培養基中使用 FectoPRO ®培養 CHO 細胞的蛋白質產量。
表 3. HEK-293 細胞在不同培養基中使用 FectoPRO ® 的蛋白質產量。
探索我們專用于 CHO 細胞的試劑盒：FectoCHO ®表達系統
FreeStyle TM、CD FortiCHO TM、CD OptiCHO TM、Expi293 TM、ExpiCHO TM和CD293 是Gibco ® 的商標。
Pro-CHO TM、PowerCHO TM和 Pro293 TM是 Lonza TM Group 的商標。
HyClone TM、HyCell TM和TransFx TM是GE Healthcare TM 的商標。
BalanCD ®和Transfectory TM是Irvine Scientific公司的商標TM。
蛋白質生產包括在細胞系中以小/中到大規模過表達重組蛋白質或肽。產生的生物分子可用于研究目的，如結構表征，一直到治療或醫學應用。
FectoPRO ®符合生物制造指南。事實上，FectoPRO ®保證不含動物源成分，并且是化學成分確定的。對生產的每個批次進行系統的批次管理和放行測試。此外，FectoPRO ®轉染試劑盒經過先進的質量控制：蛋白質生產力、細胞活力和*無菌。
此外，Polyplus-transfection ®自 2002 年起獲得 ISO 9001 質量管理體系認證；這一級別的認證向全球客戶保證，供應商已為產品開發、制造、銷售和客戶支持建立了可靠且有效的流程。
